微生物限度檢測(cè)中的膜過濾法（薄膜過濾法）是一種廣泛應(yīng)用于藥品、食品及化妝品行業(yè)的微生物定量檢測(cè)技術(shù)，其核心原理與操作要點(diǎn)如下：

一、技術(shù)原理與流程

1、過濾分離機(jī)制?

通過0.45μm微孔濾膜（特殊檢測(cè)需0.22μm）截留液體樣本中的微生物，而允許溶解性物質(zhì)通過?。

關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)?：

可處理大體積樣品（如100mL純化水），提高檢測(cè)靈敏度?

通過沖洗步驟去除樣品中的抑菌成分（如抗生素）?

2、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟?：

樣品過濾 → 濾膜轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基 → 培養(yǎng)（30-35℃, 2-5天） → 菌落計(jì)數(shù)

二、應(yīng)用場(chǎng)景對(duì)比

檢測(cè)類型? ?適用方法? ?膜過濾法優(yōu)勢(shì)?

口服液體制劑 √（替代平皿法） 避免培養(yǎng)基被高黏度樣品干擾?

注射用水 ×（需無菌檢測(cè)） 不適用

含抑菌成分的化妝品 √（需沖洗步驟） 有效去除防腐劑影響?

三、與直接接種法的核心差異

靈敏度?

膜過濾法可檢測(cè)低至1cfu/100mL的微生物，直接接種法僅適用于高濃度樣本（如≥100cfu/mL）?。

抗干擾能力?

膜過濾法通過濾膜預(yù)過濾可去除顆粒物干擾，而直接接種法易受樣品物理性質(zhì)影響?。

四、注意事項(xiàng)

濾膜選擇?：需驗(yàn)證與樣品的兼容性（如脂溶性樣品需用疏水性濾膜）?

質(zhì)量控制?：每批檢測(cè)需設(shè)置陰性對(duì)照（純化水過濾）和陽性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)菌株）

微生物限度檢測(cè)之膜過濾法（薄膜過濾法）的實(shí)驗(yàn)步驟如下，結(jié)合關(guān)鍵操作要點(diǎn)與注意事項(xiàng)：

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段

1、設(shè)備與材料滅菌?

不銹鋼濾杯、濾膜（0.45μm混合纖維素酯膜）需通過火焰灼燒（6-8秒）或高壓蒸汽滅菌?。

濾膜需檢查完整性（無破損）并提前用無菌純化水潤濕?。

2、樣品預(yù)處理?

若樣品含抑菌成分（如抗生素），需用緩沖液（如pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液）沖洗濾膜，沖洗量≥100mL?。

二、過濾操作步驟

1、組裝過濾系統(tǒng)?

用無菌鑷子將濾膜平鋪于濾杯座墊片上，移除防污染層紙片?。

輕放濾杯以避免濾膜破損，確保密封性（無漏氣聲）?。

2、抽濾過程?

倒入樣品（通常100mL），開啟真空泵（負(fù)壓-0.04~-0.06MPa）?。

黏稠樣品需分次過濾或提高負(fù)壓值?。

三、培養(yǎng)與結(jié)果判定

1、濾膜轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)?

用無菌鑷子將濾膜（菌面朝上）貼至對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基：

細(xì)菌：營養(yǎng)瓊脂（30-35℃, 48小時(shí)）

霉菌/酵母菌：玫瑰紅鈉瓊脂（23-28℃, 5-7天）?。

2、計(jì)數(shù)規(guī)則?

排除異常生長平板（如TN TC、菌落蔓延）?。

純化水標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)≤100CFU/mL?。

四、常見問題處理

問題? ?解決方案?

濾膜堵塞 樣品預(yù)過濾或增大沖洗量?

膜下方長菌 檢查濾膜安裝密封性及滅菌效果?

抑菌成分干擾 增加沖洗液體積（≥300mL）?

五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

環(huán)境控制?：操作需在B級(jí)背景下的Aji層流下進(jìn)行?。

陰性對(duì)照?：每批檢測(cè)需設(shè)置未過濾的純化水對(duì)照?。

設(shè)備維護(hù)?：過濾后需用純化水沖洗管路并火焰滅菌濾杯?。

通過規(guī)范操作可有效避免假陰性/陽性結(jié)果，確保檢測(cè)準(zhǔn)確性?。

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